Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
22
102 микроорганизмов - максимально допустимое значение: 1х102;
3 3
103 микроорганизмов - максимально допустимое значение: 1х103; и т.д. Рекомендуемые растворы и питательные среды описаны в общем разделе 2.6.13.
2.6.13. МИКРОБИЛОГИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ НЕСТЕРИЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ (ИСПЫТАНИЯ НА НАЛИЧИЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ МИКРООРГАНИЗМОВ)
Методики, изложенные в данной статье, допускают использование селективных питательных сред, которые не позволяют выделять микроорганизмы с сублетальными повреждениями. Так как для обеспечения качества лекарственного средства необходимо выявлять микроорганизмы с сублетальными повреждениями, следует предусмотреть проведение процедуры восстановления их жизнеспособности перед использованием селективных питательных сред.
Если испытуемый продукт обладает антимикробной активностью, она должна быть соответствующим способом нейтрализована.
# Допускается использование автоматизированных методов испытаний, если в результате проверки пригодности было доказано, что они имеют результаты, идентичные описанным ниже методам. Для биохимической идентификации микроорганизмов могут быть использованы готовые тест-системы.
Энтеробактерии и некоторые другие грамотрицательные бактерии
Испытание предназначено для определения бактерий семейства Enterobac-teriaceae, но также позволяет определять и другие типы микроорганизмов (например, Aeromonas, Pseudomonas).
Определение наличия бактерий. Готовят испытуемый продукт в соответствии с указаниями, приведенными в разделе 2.6.12, но с использованием питательного бульона D вместо буферизированного раствора хлорида натрия и пептона рН 7,0, гомогенизируют и инкубируют при 35-370С в течение промежутка времени, достаточного для оживления бактерий и недостаточного для инициирования их размножения (обычно 2 часа, но не более 5 часов). Контейнер встряхивают, переносят количество содержимого [гомогенат (а)], соответствующее одному грамму или одному миллилитру продукта, в 100 мл обогащенного питательного бульона Е и инкубируют при 35-370С в течение 18-48 часов. Пересевают на чашки с агаризованной средой F. Инкубируют при 35-370С в течение 18-24 часов. Продукт выдерживает испытание, если ни на одной из чашек не наблюдается рост грамотрицательных бактерий.
# 10 мл испытуемого образца, подготовленного, как описано в разделе
2.6.12, но с использованием среды №11 вместо буферного раствора с натрия хлоридом и пептоном рН 7,0, вносят в 100 мл питательной среды № 3, перемешивают и инкубируют при температуре от 30 до 35°С в течение 24 - 48 ч. При наличии роста делают пересев на среду № 4 в чашке Петри. Посевы инкубируют при температуре 30 - 35°С в течение 24 - 48 ч. Наличие роста малиновых с металлическим блеском или без него; розовых, бесцветных, блестящих, выпуклых колоний грамотрицательных палочек указывает на возможное загрязнение лекарственного средства бактериями сем. Enterobacteriaceae и некоторыми другими грамотрица-тельными бактериями. Выросшие колонии пересевают, каждую отдельно, со среды № 4 на скошенную в пробирках среду № 1 и выращивают при температуре 30 -35°С течение 18 - 20 ч. Из каждой пробирки с чистой культурой делают пересевы на среды № 6 и № 7.
После посева в половину пробирок со средой № 6 вносят по 0,5 мл стерильного вазелинового масла. Все посевы инкубируют при температуре 30 - 35°С в течение 18 - 20 ч. Ферментацию глюкозы устанавливают по изменению цвета среды № 6 из красного в желтый в пробирках с маслом и без него. О наличии нитритов в среде № 7 судят по появлению красного окрашивания при внесении в среду реактива Грисса. Параллельно исследуют чистые культуры на наличие фермента цитохромоксидазы. Если в образце обнаружены грамотрицательные
неспорообразующие палочки, которые дают отрицательную оксидазную реакцию, ферментируют глюкозу с образованием кислоты (или кислоты и газа) и восстанавливают нитраты в нитриты, лекарственное средство контаминировано бактериями семейства Enterobacteriaceae.
# Тест на цитохромоксидазу. Полоску фильтровальной бумаги смачивают реактивом и наносят стеклянной палочкой суточную чистую культуру исследуемых бактерий со среды №1. Синее окрашивание, появляющееся через 2-5 мин, свидетельствует о положительной оксидазной реакции.
Количественная оценка. Инокулируют подходящие количества питательного бульона Е гомогенатом (а) и/или его разбавлениями, содержащими, соответственно, 0,1 г, 0,01 г и 0,001 г (или 0,1 мл, 0,01 мл и 0,001 мл) испытуемого продукта. Инкубируют при температуре 35-370С в течение 24-48 часов. Каждую из культур пересевают на чашку с агаризованной средой F для достижения селективного разделения. Инкубируют при температуре 35-370С в течение 18-24 часов. Рост хорошо развитых колоний грамотрицательных бактерий, обычно красной или красноватой окраски, представляет собой положительный результат. Отмечают наименьшее количество продукта, дающее положительный результат, и наибольшее количество, дающее отрицательный результат. Вероятное количество бактерий определяют по таблице 2.6.13.-1.
